Picric acid酸性复红（VG）染色

一、Picric acid酸性复红（Van Gieson，VG）染色简介
酸性复红和Picric acid对这两种纤维都具有较强的亲合力，结果胶原纤维被酸性复红染成红色，肌肉被Picric acid染成黄色。此方法是一种优良的传统方法。

二、试剂配制
Weigert铁苏木.精液：
A液：苏木.精1g，无水.酒精100 ml。一般配制后需要数周或数月自然氧化，成熟后使用。
B液：29%三氯.化铁水溶液4 ml，蒸馏水95 ml，盐酸1 ml。
两液分别配制，临用时A、B液等量混合，过滤后使用。24h后失去染色能力。
Van Gieson液：
1%酸性复红水溶液10 ml
Picric acid饱和水溶液90 ml
临用时1:9混合过虑后使用。

三、染色步骤
1、石蜡切片脱蜡至水
2、Weigert苏木.精液5-10 min
3、充分水洗
4、Van Gieson液1-5 min
5、95%酒精迅速分化数秒
6、无水.酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固
7、结果：胶原纤维呈红色、肌肉、神经胶质、胞浆、红血球呈黄色、细胞核呈黑色或棕蓝色
（注：由于酸性复红退色较快，染色结果不能长期保存，一般只能保存3～6个月。）
四、样本说明
1、石蜡切片
取材：1、组织离体后需及时固定；2、组织标本不宜过大、过厚。
固定：1、固定液：10%福尔马林（4%多聚.甲醛）或10%中性甲醛；2、用量：一般固定液的量与组织体积比为10:1～20:1；3、固定：适宜的固定时间，主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存：切片经60℃烤片3-5小时后，可于常温或4℃干燥保存。

2、冰冻切片
取材：取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。
固定：样本冰冻切片后，应立即放入甲醇、丙.酮、95%酒精、4%多聚.甲醛等固定液中固定。
保存：固定好的切片自然风干，密封后置于-80℃、-20℃保存，尽快用于后续实验。

3、细胞块石蜡切片
细胞量较多的样品，可离心分离所需细胞，用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块，然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。

4、细胞爬片
在孔板里做的细胞爬片，爬片取出后，用PBS洗涤2次（根据研究目的，PBS洗涤可选择不做），用4%多聚.甲醛4℃固定15分钟，将表面液体吹干，置于-20℃保存。若在短时间内即开展实验，可在加固定液后，于4℃冰箱中放置一段时间。

5、细胞涂片
细胞涂片常用的固定液有95%酒精（最为常用）、酒精-冰醋.酸液、Ethyl ether-酒精液和Carney’s液等。

五、注意事项
1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚.甲醛，能使大多数抗原保存良好，适用于免疫组织化学。
2、病理实验切片最好是防脱片，以免实验过程中出现掉片。若客户提供切片，应告知切片有无防脱处理。
3、骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样本，实验过程中有较高的掉片几率。
4、客户可提供组织块（以10%福尔马林、4%多聚.甲醛或10%中性甲醛固定，如组织块极小请事先说明）、蜡块或切片（使用免疫组化专用切片，以避免实验过程中掉片）
5、待检测蛋白的种属、实验分组情况及实验背景资料、其他具体要求等需事先说明。
6、若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验，需进行脱钙处理。
7、浸泡在固定液中的组织样本，在运输中容器需密封，防止破碎、渗漏。